蒲公英 - 制藥技術的傳播者 GMP理論的實踐者

 找回密碼
 立即注冊

QQ登錄

只需一步,快速開始

使用微信帳號登錄

使用微信帳號登錄

搜索
查看: 3648|回復: 35
打印 上一主題 下一主題
收起左側

[2020版藥典] 2020藥典學習筆記-1143細菌內毒素檢查法

  [復制鏈接]
大師
跳轉到指定樓層
樓主
發表于 2020-6-19 08:00:00 | 只看該作者 |只看大圖 回帖獎勵 |倒序瀏覽 |閱讀模式

歡迎您注冊蒲公英

您需要 登錄 才可以下載或查看,沒有帳號?立即注冊

x
本帖最后由 歪把子 于 2020-6-19 09:52 編輯

11 4 3 細菌內毒素檢查法

2020.6.19 9:50  @瓶瓶  瓶瓶版主提醒excel截圖錯誤,進行了替換

注:該檢查法變化不大,可結合指導原則 9251《細菌內毒素檢查法應用指導原則》(新增,見文末學習內容)一起學習;能夠擴展更多背景知識。

本法系利用鱟試劑來……,1E U 與1 個內毒素國際單位(IU)相當。
細菌內毒素國家標準品系自大腸埃希菌提取精制,并以細菌內毒素國際標準品標定其效價。用于標定……光度測定法中標準曲線可靠性試驗。
細菌內毒素檢查用水應符合滅菌注射用水標準,其內毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝膠法)或小于0. 005EU/ml(用于光度測定法),且對內毒素試驗無干擾作用。

學習:通常,按照藥典此條款和GMP相關要求,需要對采購的檢查用水進行要收和檢驗。至少應該做到理化指標,其它應該進行必要的審計和索取廠家報告單。當然,最好的情況是全項檢驗(你具備此內毒素限值的檢驗能力嗎……)

鱟試劑是從鱟的血液中提取出的凍干試劑,可以與細菌內毒素發生凝集反應。除了內毒素,鱟試劑還與某些(3-葡聚糖反應,產生假陽性結果。如遇含有(β-葡聚糖的樣品,可使用去G 因子鱟試劑或G 因子反應抑制劑來排除鱟試劑與β-葡聚糖的反應。

學習:這一段是新增內容。增加了檢驗原理的簡介,明確相關反應的干擾因素,指明去除干擾的兩種方法。根據相關研究進展其實還有新的檢驗方法……《中國藥典分析檢測技術指南》介紹比較像詳細。這也不是新知識點,有相關品種的需要注意,此類假陽性的問題。

試驗所用的器皿需經處理,以去除可能存在的外源性內毒素。耐熱器皿常用干熱滅菌法(250°C 、至少3 0 分鐘以上)……并且對試驗無干擾的器具。

學習:刪除“以上”,挺好不啰嗦了。

供試品溶液的制  某些供試品……在已去除內毒素的容器中配制。所用溶劑、酸堿溶液及緩沖液應不含內毒素和干擾因子

學習:刪除“緩沖液必須經過驗證不含內毒素和干擾因子”的表述,換成上述標綠內容。那么是否意味著溶劑、酸堿溶液及緩沖液向著購買商品裝更進一步了呢?以免自己無法證明所用材料“內毒素和干擾因子”。

內毒素限值的確定  ……
確定最大有效稀釋倍數(MVD)  最大有效稀釋倍數是……許達到稀釋的最大倍數(1→MVD),在不超過此稀釋倍數的濃度下……。

學習:刪除標紅內容,刪了也就刪了吧。貌似內毒素檢極低的最好選擇熱原法。

方法1 凝膠法
……
鱟試劑靈敏度復核試驗
在本檢查法規定的條件下,……應進行鱟試劑靈敏度復核試驗。
根據鱟試劑靈敏度的標示值(λ),將細菌內毒素國家標準品或細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水溶解,在旋渦混合器上混勻15分鐘或參照標準品說明書中要求的混勻時間進行操作,然后制成2λ 、1、0.5λ和0. 25λ四個濃度的內毒素標準溶液,每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30秒或參照標準品說明書中要求的混勻時間進行操作。取不同濃度的內毒素標準溶液,分別與等體積(如0.1ml) 的鱟試劑溶液混合,每一個內毒素濃度平行做4 管;另外取2管加人等體積的細菌內毒素檢查用水作為陰性對照。將試管中溶液輕輕混勻后,封閉管口,垂直放人37°C±1°C 的恒溫器中,保溫6 0 分鐘士2 分鐘。

學習:標紅為新增的選項,核對說明書。標準品的實踐使用過程中,需要經常性再次混勻約不少于30秒;若多批樣本間樣品陽性制備間隔時間長,再用前應適當時間再次混合。目的是避免內毒素自身的聚集現象干擾檢驗。特意看了一下中檢院的說明書(文末有附):“注意:1、使用時加入細菌內毒素檢查用水1ml,復溶后置旋渦混合器上混勻15 分鐘。2、本品為一次性使用。3、本品稀釋按以下方式進行,每步置旋渦混合器上混勻30 秒……其余可根據情況而定。”

小調查:通常“封閉管口”用封口膜,你們呢?  恒溫器可以是水浴鍋嗎?我用的是某斯的專用定溫定時設備。

將試管從恒溫器中輕輕取……當最大濃度2λ管均為陽性……按下式計算反應終點濃度的幾何平均值……

學習:幾何平均值。又看到統計學知識,昨晚看了休閑區的一個帖子……不想說了。做了一個計算表,還沒有按xxx程序進行確認。貼個圖先,整好了發上來。留坑。



干擾試驗  ……
……
當進行新藥的內毒素檢查試驗前,或無內毒素檢查項的品種建立內毒素檢査法時,須進行干擾試驗。
當鱟試劑、供試品的處方、生產工藝改變或試驗環境中發生了任何有可能影響試驗結果的變化時,須重新進行干擾試驗。
……

學習:對于新品種,干擾試驗時,兩家企業的鱟試劑對不少于三批進行干擾試驗。這不是新聞了,但還是要注意一下。9251《細菌內毒素檢查法應用指導原則》表述更明確。在上幾版的“標準操作規范”中均如此表述。不想拓展了,打字累。

檢查法
(1)凝膠限度試驗
……。若溶液A 的兩個平行管中的一管為陽性,另一管為陰性,需進行復試。復試時溶液A 需做4 支平行管,若所有平行管均為陰性,判定供試品符合規定,否則判定供試品不符合規定。……

學習:你的SOP中設計復檢記錄了嗎……。注意:藥典規定了復檢方案的,OOS調查時候不要整什么幺蛾子。

(2)凝膠半定量試驗  ……
方法2 光度測定法
……(3) 陰性對照吸光度小于或透光率大于標準曲線最低點的檢測值或反應時間大于標準曲線最低點的反應時間。

學習:增加的這個內容考慮了不同廠家儀器的檢驗原理。

結果判斷  若供試品溶液所有平行管的平均內毒素濃度乘以稀釋倍數后,小于規定的內毒素限值,判定供試品符合規定。若大于或等于規定的內毒素限值,判定供試品不符合
規定。

因指導原則 9251《細菌內毒素檢查法應用指導原則》是新增指導原則,等待專家解讀。需要關注的幾點是:
……
2. 細菌內毒素檢查方法的選擇
(2)光度法  度法光度法(包括濁度法和顯色法)可定量檢測內毒素的含量,能較為準確評估產品在生產過程中污染的相對風險,定量檢測的數據不僅有利于追蹤產品質量趨勢,還能起到風險預警的作用,達到數據完整性的要求
供試品能否采用光度法進行檢測,須通過干擾試驗確定。光度測定法可通過回收率判斷出干擾的趨勢,尤其對于研究性質的樣品(如新產品)更具有優勢。
由于光度法的檢測范圍比凝膠法寬,使得有干擾的樣品可以有更大的稀釋倍數,對于部分使用凝膠法無法排除干擾的樣品,可以嘗試使用光度法建立細菌內毒素檢測方法。

學習:好像數據完整性越來越好玩了。雖然定量方法很ok,別忘了,通用技術要求中可是明確指出:“。當測定結果有爭議時,除另有規定外,以凝膠限度試驗結果為準”。當然,你可以活學活用“另有規定”。

4. 產品細菌內毒素檢查法的建立
建立品種的細菌內毒素檢查法時,為驗證樣品和不同生產廠家鱟試劑反應的一致性,應使用兩個生產廠家的鱟試劑對至少三批樣品進行干擾試驗
建立產品細菌內毒素檢查法時,若無法排除供試品對細菌內毒素檢查的干擾作用,或只能使用最高靈敏度鱟試劑(凝膠法為0.03EU/ml, 光度法為0.001EU/ml)才能排除干擾,則該品種不宜建立細菌內毒素檢查項
5. 其他
目前新的細菌內毒素檢測方法不斷出現,以適應特殊品種細菌內毒素檢查的需要,或減少鱟試劑的使用量。如重組C 因子法(見附)、微量凝膠法等。當采用細菌內毒素檢查法(通則1143)中未收載的方法檢測產品的細菌內毒素時,應符合“凡例”的相關規定。

學習:四部凡例中的要求抄錄此地:“檢驗方法和限度  二十一、本版藥典品種正文收載的所有品種,均應按規定的方法進行檢驗。采用藥典規定的方法進行檢驗時,應對方法的適用性進行確認。如采用其他方法,應進行方法學驗證,并與規定的方法比對,根據試驗結果選擇使用,但應以本版藥典規定的方法為準”。也即,用可以,要對比,最終還是藥典方法為準。

留幾張圖吧,細節自己去看我的系列圖
【夜談】質控系列腦圖整理貼+資源分享http://www.dtwsje.icu/thread-527866-1-1.html

文末附件不要下,因為這批已經斷貨。

往期回顧:
2020藥典一部-凡例個人學習筆記   http://www.dtwsje.icu/thread-591271-1-1.html
2020藥典 1101無菌檢查法個人學習筆記  http://www.dtwsje.icu/thread-603927-1-1.html




也許,您的一個專業度或者一個回復或者一個建議/意見,就能讓我溫暖。
                                                                  下邊 ↓↓↓藥學專業認可  ↓↓↓。

細菌內毒素工作標準品(盒)201987.pdf

85.8 KB, 下載次數: 20, 下載積分: 金幣 -1

售價: 5 金幣  [記錄]

糊弄人

本帖被以下淘專輯推薦:

回復

使用道具 舉報

藥徒
沙發
發表于 2020-6-19 08:03:15 | 只看該作者
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
板凳
發表于 2020-6-19 08:03:24 | 只看該作者
學習學習………!
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
地板
發表于 2020-6-19 08:05:43 | 只看該作者
感謝老師分享資料!
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
5#
發表于 2020-6-19 08:10:40 | 只看該作者

學習學習………!
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
6#
發表于 2020-6-19 08:35:11 | 只看該作者
我想請教老師,干擾實驗的EXCEL計算表格怎么做確認?有什么可以借鑒的資料么?
回復 支持 反對

使用道具 舉報

7#
發表于 2020-6-19 08:35:44 | 只看該作者
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
8#
發表于 2020-6-19 09:44:45 | 只看該作者

謝謝分享,學習以下!
回復 支持 反對

使用道具 舉報

大師
9#
 樓主| 發表于 2020-6-19 10:01:51 | 只看該作者
回復了的請注意,有更新。這就是回復的價值。excel的貼圖有問題。給自己留坑太多了。
具體例子可去《中國藥品檢驗標準操作規范》-2019 第487頁查詢對比。
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
10#
發表于 2020-6-19 10:32:55 | 只看該作者
這。。。很細致
回復 支持 反對

使用道具 舉報

11#
發表于 2020-6-19 13:29:31 | 只看該作者
我們一般不會用到表格計算,直接把λ代入計算,總共只有這幾種結果,2λ、8的1/4次方λ、4的1/4次方λ、2的1/4次方λ、λ、0.5的1/4次方λ、0.5的2×1/4次方λ、0.5的3×1/4次方λ、0.5λ,開根號即可計算出來。
回復 支持 反對

使用道具 舉報

12#
發表于 2020-6-19 13:37:33 | 只看該作者
回復 支持 反對

使用道具 舉報

13#
發表于 2020-6-19 13:40:32 | 只看該作者
我想請教一下,對于注射劑的原輔料建立方法時也需要三批嗎?17版的藥典分析技術指南上寫明了是在為注射用品、生物制品建立方法時,需要三批,20版指導原則,直接把注射用品和生物制品給去掉了,我們有點為難。而且早期的臨床研究樣品也可能沒有三批。我們就出現過只有一批、兩批的

點評

指導原則是個參考,具體以官方解讀或者咨詢注冊審批機構。可能能夠通融。  詳情 回復 發表于 2020-6-19 19:06
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
14#
發表于 2020-6-19 13:49:15 | 只看該作者
挺好,支持
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥生
15#
發表于 2020-6-19 14:15:28 | 只看該作者
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
16#
發表于 2020-6-19 14:25:21 | 只看該作者
學習了,厲害
回復 支持 反對

使用道具 舉報

大師
17#
 樓主| 發表于 2020-6-19 19:06:19 | 只看該作者
雁南飛1 發表于 2020-6-19 13:40
我想請教一下,對于注射劑的原輔料建立方法時也需要三批嗎?17版的藥典分析技術指南上寫明了是在為注射用品 ...

指導原則是個參考,具體以官方解讀或者咨詢注冊審批機構。可能能夠通融。
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
18#
發表于 2020-6-20 09:45:35 | 只看該作者
正好也在學習
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
19#
發表于 2020-6-20 10:37:22 | 只看該作者
學習學習………!
回復 支持 反對

使用道具 舉報

藥徒
20#
發表于 2020-6-20 10:37:36 | 只看該作者
指導原則是個參考,具體以官方解讀或者咨詢注冊審批機構。可能能夠通融。
回復 支持 反對

使用道具 舉報

您需要登錄后才可以回帖 登錄 | 立即注冊

本版積分規則

×友情提示
1、無權下載附件會員可能原因:1.“待驗證用戶組“,請點擊注冊郵箱里面收到的確認郵件即可; 2.作者設定權限的,提高用戶組級別即可
2、對本站的任何疑問或合作需求,請聯系微信tank066,關于怎樣提高用戶組/積分:http://www.dtwsje.icu/thread-6764-1-1.html
3、注冊用戶在本社區發表、轉載的任何作品僅代表其個人觀點,不代表本社區認同其觀點。
4、如果存在違反國家相關法律、法規、條例的行為,我們有權在不經作者準許的情況下刪除其在本論壇所發表的文章。
5、所有網友不要盜用有明確版權要求的作品,轉貼請注明來源,否則文責自負。

QQ|小黑屋|手機版|蒲公英|ouryao|蒲公英 ( (京)-非經營性-2014-0058 京ICP備14042168號 京ICP證150354號 )

GMT+8, 2020-7-13 22:29 , Processed in 0.102526 second(s), 76 queries .

Powered by Discuz! X3.4

Copyright © 2001-2020, Tencent Cloud.

快速回復 返回頂部 返回列表
腾讯欢乐捕鱼上分技巧 股票配资好做吗 股票行情今天查询 湖北体彩11选五走势图l 246天天好彩精选资料大全天下彩 广东好彩1生肖走势图 投资理财产品排行 燕赵风采20选5走势图 股票型基金 快3河南 体彩浙江6+1开奖结果20036 广东11选5任选三计划 如何看懂布林带k线图 黑龙江体彩6加1开奖号 正好网湖北11选5走势图 广东十一选五开奖公告 炒股实时行情